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Resumo: O biofilme caracteriza uma estratégia de sobrevivência das bactérias frente aos estresses ambientais, que concede proteção à atuação de agentes biocidas além de concentrar nutrientes e prevenir a desidratação. É de difícil eliminação do ambiente, e consequentemente, uma fonte potencial e permanente de contaminação tanto para ambientes hospitalares quanto para a indústria alimentícia. Objetivou-se caracterizar a estrutura e a composição de biofilmes de 11 cepas multirresistentes de diferentes espécies e/ou sorovares com importância para esses ambientes, e a partir desses resultados, desenvolver novos produtos capazes de inibir a formação do biofilme e de destruir o biofilme maduro. Microscopia Eletrônica de Varredura determinou a ultraestrutura do biofilme de cinco cepas enquanto a Microscopia de fluorescência forneceu o parâmetro qualitativo para as frações proteicas e de carboidratos, constituintes da matriz do biofilme das mesmas cepas. As frações de carboidratos, ácido desoxirribonucleicoextracelular (DNAe) e proteínas que compõem a matriz foram quantificadas nas 11 cepas por tratamento enzimático com Metaperiodato de sódio, DNAse e Proteinase K, respectivamente. A fração de maior teor na biomassa total das cepas alternou-se entre proteína e carboidratos. Salmonella Enteritidis ATCC 13076 –SE (61,5%), Pseudomonas aeruginosa –PAO (50,5%) eKlebsiella pneumoniae produtora de carbapenemase-KPC (48,3%) apresentaram biomassa com o maior teor de carboidratos. Já a biomassa de maior teor de DNAe foi encontrada em SE (57,3%) e Acinetobacter baumannii (40,6%), enquanto o maior teor de proteína foi observado em Salmonella Choleraesuis (77,1%). O parâmetro qualitativo deixou evidente a existência das frações proteicas e decarboidratos na biomassa dascepas. Quatro produtos foram desenvolvidos pela empresa parceira e testados sobre as 11 cepas, sendo eles P1-Start Solvquat, P2-Start Tensoacid, P3-Start Tensoenzime P4-Ácido Hipocloroso. De forma geral os produtos foram mais eficazes em inibir a formação do biofilme do que degradar o biofilme maduro. P4 apresentou a maior eficiência na inibiçãoda formação do biofilme em todas as cepas enquanto sobre o biofilme maduro o produto mais eficaz variou entre as cepas.